1、腦組織和神經(jīng)組織應(yīng)采用灌注固定后，再進(jìn)行后固定。

2、組織取材注意事項(xiàng)：

（1）標(biāo)本新鮮：組織要求離體后30min~2h內(nèi)浸入固定液，尤其是開(kāi)展分子生物學(xué)工作。動(dòng)物組織取材要求心臟還在跳動(dòng)時(shí)取材。

（2）注意防止人為因素的影響刀和剪要快，避免擠壓。

（3）組織塊的大小 厚為0.1~0.3cm，大小可根據(jù)需要而定。

Fisher細(xì)胞爬片的制作方法

1.爬片可用一般的蓋玻片，也可用爬片。

2.應(yīng)用蓋玻片，可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板；裁剪時(shí)可用前護(hù)士輸液用于打開(kāi)玻璃安瓶的小沙輪，或者是口腔科的那種小沙輪，輕輕劃一下后，稍用力一掰就分開(kāi)了。如果接種大皿的話，一般不將蓋玻片切開(kāi)，直接清潔后放入培養(yǎng)皿中，到染色時(shí)再將之切開(kāi)，這樣既保證了細(xì)胞均一性，又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色。

3.將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過(guò)夜，第二天先用自來(lái)水沖洗20遍，再置于無(wú)水酒清中浸泡6小時(shí)，再用三蒸水沖洗3遍，放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒。

4.高壓后取出放入烤箱中烤干，備用。烤干后可放入超凈臺(tái)中。

5.關(guān)于多聚賴氨酸，很多人都將玻片用此處理，以使細(xì)胞與玻片結(jié)合更牢。但我在做爬片時(shí)從來(lái)沒(méi)用過(guò)多聚賴氨酸，細(xì)胞貼壁仍然很好，且在做后續(xù)的免疫細(xì)胞化學(xué)染色、tunel等凋亡檢測(cè)、免疫熒光等也從未脫過(guò)片。